攪拌式多肽合成儀是一種基于固相多肽合成法(SPPS)的自動(dòng)化設(shè)備,通過(guò)程序控制實(shí)現(xiàn)氨基酸的逐個(gè)偶聯(lián)、脫保護(hù)、洗滌等步驟,最終合成目標(biāo)多肽鏈。
攪拌式多肽合成儀操作流程:
準(zhǔn)備階段:
環(huán)境要求:選擇干燥、清潔、溫度穩(wěn)定的場(chǎng)所(20℃±5℃),避免潮濕、高溫或灰塵干擾。
設(shè)備檢查:確保儀器安裝平穩(wěn),電源電壓、頻率與設(shè)備要求匹配(如壓縮空氣壓力“AIR”表需60-100psi,“N?”表需5-10psi)。檢查溶劑儲(chǔ)液瓶、氣體管道連接是否緊密,防止泄漏。
試劑準(zhǔn)備:準(zhǔn)備高純度氨基酸、活化試劑(如HBTU)、溶劑(DMF、DCM)及樹(shù)脂,確保無(wú)雜質(zhì)。根據(jù)合成方案稱(chēng)量試劑,嚴(yán)格按比例混合(如3倍過(guò)量氨基酸用于偶聯(lián)反應(yīng))。
樹(shù)脂處理:將樹(shù)脂加入反應(yīng)器,用DCM溶脹后抽干,再用DMF洗滌去除雜質(zhì)。
合成階段:
輸入序列與參數(shù):輸入多肽序列,設(shè)定反應(yīng)條件(溫度、時(shí)間、溶劑比例)。示例:Fmoc脫保護(hù)(20%哌啶/DMF,5分鐘×2次);偶聯(lián)反應(yīng)(3倍過(guò)量氨基酸,1小時(shí))。
啟動(dòng)程序:運(yùn)行設(shè)備自檢程序,校準(zhǔn)溫度、壓力、取液針等參數(shù),確保傳感器精度。打開(kāi)合成儀電源及壓縮空氣開(kāi)關(guān),啟動(dòng)預(yù)設(shè)程序。
自動(dòng)合成:儀器自動(dòng)完成脫保護(hù)、偶聯(lián)、洗滌循環(huán),全程監(jiān)測(cè)反應(yīng)溫度、壓力及pH值。
后處理階段:
裂解:加入裂解液(如TFA/水/三異丙基硅烷=95:2.5:2.5),室溫?cái)嚢?小時(shí),將多肽從樹(shù)脂上裂解下來(lái)。
純化:過(guò)濾除去樹(shù)脂,濃縮裂解液后用乙*沉淀粗肽,通過(guò)離心、洗滌得到固體產(chǎn)物。使用HPLC純化,去除雜質(zhì)。